Com base no método de contagem de placas, como ocorre a quantificação de colônias em amostras?
Passo 1
O que o enunciado pede: explicar, com base no método de contagem de placas, como se quantificam colónias (ou seja, como se obtém o número de unidades formadoras de colónia por volume de amostra).
Informações dadas (implícitas no enunciado): o método envolve preparar placas, incubá‑las, contar colónias e transformar essa contagem num valor por volume (por ex., por mL). Não há dados numéricos específicos fornecidos — a explicação será genérica e com exemplos práticos.
Informações dadas (implícitas no enunciado): o método envolve preparar placas, incubá‑las, contar colónias e transformar essa contagem num valor por volume (por ex., por mL). Não há dados numéricos específicos fornecidos — a explicação será genérica e com exemplos práticos.
Passo 2
Conceito-chave — o que se conta realmente: na prática conta‑se colónias, não células isoladas. Cada colónia que aparece numa placa presumivelmente nasceu de uma ou de poucas células muito próximas; por isso o resultado é expresso em Unidades Formadoras de Colónia por volume, abreviado
(ou, em português,
= unidades formadoras de colónia por mililitro). A distinção é importante: uma colónia pode vir de 1 célula ou de um agregado; por isso usa‑se o termo “UFC”, não “células”.
Passo 3
Fluxo geral do método (passo a passo prático):
- Coleta da amostra (líquida ou homogenizada).
- Preparação de diluições decimais seriadas para reduzir a concentração até um intervalo contável.
- Placar as diluições em placas de ágar por espalhamento (spread plate), vertido (pour plate) ou spot/drop plate.
- Incubar nas condições apropriadas (temperatura e tempo).
- Contar o número de colónias em placas adequadas.
- Calcular a concentração original usando a contagem, o volume colocado na placa e o fator de diluição.
Passo 4
Como e por que fazer diluições seriadas:
- Objetivo: obter ao menos uma placa com um número “contável” de colónias (nem muito poucas, nem muito numerosas).
- Procedimento típico: fazer diluições 1:10 em série. Ex.: retirar
parte da amostra e juntar a partes de diluente → diluição . Repetir para obter etc. - Notação: se a amostra original é a diluição
, a primeira diluição é , a segunda e assim por diante. O fator de multiplicação para voltar ao original é o inverso da diluição (por ex. para o fator é ).
Passo 5
Métodos de semeadura (quem espalha e quanto volume):
- Spread plate: espalha‑se geralmente
( ) da diluição sobre a superfície do ágar e espalha com uma espátula estéril. Bom para contagens superficiais. - Pour plate: mistura‑se
ou da diluição com ágar líquido e verte‑se na placa; colónias podem crescer dentro do ágar. - Drop/spot plate: deposita‑se várias gotas pequenas (p.ex.
cada) em diferentes diluições na mesma placa — método rápido para triagem.
Escolha do volume: muito comum usarpara spread plates; atenção a usar sempre o volume correto na fórmula de cálculo.
Passo 6
Contagem das colónias e critérios de seleção:
- Após incubação, escolhemos placas com contagem aceitável. Regra prática comum: escolher placas com entre
e colónias. Por quê? Abaixo de a estatística é ruim (grande erro relativo); acima de há sobreposição e erros por colónias que se fundem. - Se houver múltiplas placas da mesma diluição, conta‑se cada uma e depois faz‑se a média.
- Se uma placa estiver “TNTC” (too numerous to count), descartar para aquela diluição e usar diluição maior (mais diluída). Se não houver placa contável em nenhuma diluição, o resultado será apenas um limite (ex.: < valor mínimo detectável).
Passo 7
Fórmula de cálculo e significado das variáveis:
Apresentação da fórmula básica em bloco:
Apresentação da fórmula básica em bloco:
onde:
-
= número de colónias contadas na placa (ou média das contagens se houver réplicas); -
= volume semeado na placa, em mililitros (por ex. para use ); -
= fator de diluição inverso da placa contada, isto é, . Ex.: se a placa veio da diluição , então .
Expliquei cada variável para você poder aplicar direto na prova.
Passo 8
Exemplo numérico passo a passo (faça isso na prova para conferir):
- Suponha que em uma placa da diluição
foram contadas colónias e o volume espalhado foi ( ). - O fator de diluição é
. Aplicando a fórmula:
Calcule em passos:
Resultado:
.
Passo 9
Médias com réplicas e arredondamento:
- Se houver duas ou três placas da mesma diluição, calcule a média das contagens:
. Use na fórmula do Passo 7. - Arredonde o resultado de acordo com a precisão dos dados (geralmente 2 ou 3 algarismos significativos) e reporte com unidade:
.
Passo 10
Limites do método, fontes de erro e observações úteis para prova:
- Limite inferior: se a placa mais concentrada (menor diluição) tiver zero colónias, só se pode reportar “< limite de detecção” (por ex. se a menor diluição testada foi
e foi semeado, o limite seria ). - Limite superior: “TNTC” precisa de nova série de diluições.
- Erros comuns: esquecer de converter volume para mL, usar o fator de diluição errado (confundir
com ), não usar a média de réplicas, contar placas fora da faixa – . - Controle de qualidade: usar placas controle, fazer diluições com pipetas calibradas, e anotar todas as diluições e volumes no caderno.
Passo 11
Dicas rápidas para a prova (como aplicar o método sob pressão):
- Sempre identifique qual diluição originou a placa contada (escrever claramente na placa ou no enunciado).
- Verifique o volume semeado e converta para mL antes de aplicar a fórmula.
- Se houver várias placas com contagens aceitáveis em diluições diferentes, escolha a placa cuja contagem esteja na faixa
– ; se houver mais de uma nessa faixa, faça a média. - Treine um exemplo rápido antes da prova para ganhar fluidez (por ex. o exemplo do Passo 8).
Passo 12
Resumo didático final: o método transforma uma contagem de colónias em
multiplicando a contagem pelo inverso do volume semeado e pelo fator que recupera a concentração original (o inverso da diluição). É simples, mas exige atenção com diluições, volumes e seleção da placa adequada.
Resposta
A quantificação é feita contando‑se colónias em placas obtidas de diluições seriadas e convertendo essa contagem em unidades formadoras de colónia por volume usando a fórmula
onde
é o número de colónias (ou média),
é o volume semeado em mL e
é o fator de diluição inverso (por ex.
para diluição
); escolhem-se placas com contagem adequada (normalmente
–
colónias).