Com base no método de contagem de placas, como ocorre a quantificação de colônias em amostras?

Passo 1

O que o enunciado pede: explicar, com base no método de contagem de placas, como se quantificam colónias (ou seja, como se obtém o número de unidades formadoras de colónia por volume de amostra).
Informações dadas (implícitas no enunciado): o método envolve preparar placas, incubá‑las, contar colónias e transformar essa contagem num valor por volume (por ex., por mL). Não há dados numéricos específicos fornecidos — a explicação será genérica e com exemplos práticos.

Passo 2

Conceito-chave — o que se conta realmente: na prática conta‑se colónias, não células isoladas. Cada colónia que aparece numa placa presumivelmente nasceu de uma ou de poucas células muito próximas; por isso o resultado é expresso em Unidades Formadoras de Colónia por volume, abreviado \mathrm{UFC/mL} (ou, em português, \mathrm{UFC/mL} = unidades formadoras de colónia por mililitro). A distinção é importante: uma colónia pode vir de 1 célula ou de um agregado; por isso usa‑se o termo “UFC”, não “células”.

Passo 3

Fluxo geral do método (passo a passo prático):
  • Coleta da amostra (líquida ou homogenizada).
  • Preparação de diluições decimais seriadas para reduzir a concentração até um intervalo contável.
  • Placar as diluições em placas de ágar por espalhamento (spread plate), vertido (pour plate) ou spot/drop plate.
  • Incubar nas condições apropriadas (temperatura e tempo).
  • Contar o número de colónias em placas adequadas.
  • Calcular a concentração original usando a contagem, o volume colocado na placa e o fator de diluição.

Passo 4

Como e por que fazer diluições seriadas:
  • Objetivo: obter ao menos uma placa com um número “contável” de colónias (nem muito poucas, nem muito numerosas).
  • Procedimento típico: fazer diluições 1:10 em série. Ex.: retirar 1 parte da amostra e juntar a 9 partes de diluente → diluição 10^{-1}. Repetir para obter 10^{-2},\;10^{-3}, etc.
  • Notação: se a amostra original é a diluição 10^{0}, a primeira diluição é 10^{-1}, a segunda 10^{-2} e assim por diante. O fator de multiplicação para voltar ao original é o inverso da diluição (por ex. para 10^{-4} o fator é 10^{4}).

Passo 5

Métodos de semeadura (quem espalha e quanto volume):
  • Spread plate: espalha‑se geralmente 0,1\\ \text{mL} ( 0,1\\ \text{mL}) da diluição sobre a superfície do ágar e espalha com uma espátula estéril. Bom para contagens superficiais.
  • Pour plate: mistura‑se 1,0\\ \text{mL} ou 0,1\\ \text{mL} da diluição com ágar líquido e verte‑se na placa; colónias podem crescer dentro do ágar.
  • Drop/spot plate: deposita‑se várias gotas pequenas (p.ex. 10\\ \mu\text{L} cada) em diferentes diluições na mesma placa — método rápido para triagem.
    Escolha do volume: muito comum usar 0,1\\ \text{mL} para spread plates; atenção a usar sempre o volume correto na fórmula de cálculo.

Passo 6

Contagem das colónias e critérios de seleção:
  • Após incubação, escolhemos placas com contagem aceitável. Regra prática comum: escolher placas com entre 30 e 300 colónias. Por quê? Abaixo de 30 a estatística é ruim (grande erro relativo); acima de 300 há sobreposição e erros por colónias que se fundem.
  • Se houver múltiplas placas da mesma diluição, conta‑se cada uma e depois faz‑se a média.
  • Se uma placa estiver “TNTC” (too numerous to count), descartar para aquela diluição e usar diluição maior (mais diluída). Se não houver placa contável em nenhuma diluição, o resultado será apenas um limite (ex.: < valor mínimo detectável).

Passo 7

Fórmula de cálculo e significado das variáveis:
Apresentação da fórmula básica em bloco:
\mathrm{UFC/mL} \;=\; \frac{N}{V}\times DF
onde:
  • N = número de colónias contadas na placa (ou média das contagens se houver réplicas);
  • V = volume semeado na placa, em mililitros (por ex. para 0,1\\ \text{mL} use V=0,1);
  • DF = fator de diluição inverso da placa contada, isto é, DF = \dfrac{1}{\text{diluição}}çã. Ex.: se a placa veio da diluição 10^{-4}, então DF = 10^{4}.
Expliquei cada variável para você poder aplicar direto na prova.

Passo 8

Exemplo numérico passo a passo (faça isso na prova para conferir):
  • Suponha que em uma placa da diluição 10^{-4} foram contadas N=45 colónias e o volume espalhado foi 0,1\\ \text{mL} ( V=0,1).
  • O fator de diluição é DF=10^{4}. Aplicando a fórmula:
\mathrm{UFC/mL} = \frac{45}{0,1}\times 10^{4}.
Calcule em passos:
\frac{45}{0,1}=450,
450\times 10^{4}=4{,}5\times 10^{6}.
Resultado: \mathrm{UFC/mL}=4{,}5\times 10^{6}.

Passo 9

Médias com réplicas e arredondamento:
  • Se houver duas ou três placas da mesma diluição, calcule a média das contagens: \bar{N}=\dfrac{N_{1}+N_{2}+\dots}{\text{número de placas}}ú. Use \bar{N} na fórmula do Passo 7.
  • Arredonde o resultado de acordo com a precisão dos dados (geralmente 2 ou 3 algarismos significativos) e reporte com unidade: \mathrm{UFC/mL}.

Passo 10

Limites do método, fontes de erro e observações úteis para prova:
  • Limite inferior: se a placa mais concentrada (menor diluição) tiver zero colónias, só se pode reportar “< limite de detecção” (por ex. se a menor diluição testada foi 10^{0} e 0,1\\ \text{mL} foi semeado, o limite seria <10\\ \mathrm{UFC/mL}).
  • Limite superior: “TNTC” precisa de nova série de diluições.
  • Erros comuns: esquecer de converter volume para mL, usar o fator de diluição errado (confundir 10^{-4} com 10^{4}), não usar a média de réplicas, contar placas fora da faixa 30 300.
  • Controle de qualidade: usar placas controle, fazer diluições com pipetas calibradas, e anotar todas as diluições e volumes no caderno.

Passo 11

Dicas rápidas para a prova (como aplicar o método sob pressão):
  • Sempre identifique qual diluição originou a placa contada (escrever claramente na placa ou no enunciado).
  • Verifique o volume semeado e converta para mL antes de aplicar a fórmula.
  • Se houver várias placas com contagens aceitáveis em diluições diferentes, escolha a placa cuja contagem esteja na faixa 30 300; se houver mais de uma nessa faixa, faça a média.
  • Treine um exemplo rápido antes da prova para ganhar fluidez (por ex. o exemplo do Passo 8).

Passo 12

Resumo didático final: o método transforma uma contagem de colónias em \mathrm{UFC/mL} multiplicando a contagem pelo inverso do volume semeado e pelo fator que recupera a concentração original (o inverso da diluição). É simples, mas exige atenção com diluições, volumes e seleção da placa adequada.

Resposta

A quantificação é feita contando‑se colónias em placas obtidas de diluições seriadas e convertendo essa contagem em unidades formadoras de colónia por volume usando a fórmula
\mathrm{UFC/mL}=\frac{N}{V}\times DF,
onde N é o número de colónias (ou média), V é o volume semeado em mL e DF é o fator de diluição inverso (por ex. 10^{4} para diluição 10^{-4}); escolhem-se placas com contagem adequada (normalmente 30 300 colónias).

Exercícios relacionados