Descreva o procedimento de contagem em placas de microrganismos do solo feito na aula prática.

Passo 1

O enunciado pede para descrever o procedimento experimental de contagem de microrganismos em placas a partir de amostras de solo, tema ligado a microbiologia agrícola e ambiental. Para isso, vamos precisar de amostra de solo, solução salina estéril, tubos de ensaio, pipetas graduadas, placas de ágar nutritivo, estufa de incubação e contador de colônias ou lupa.

Passo 2

Preparação da suspensão inicial: pesar aproximadamente ,1 g de solo em tubo estéril e adicionar ,9 mL de solução salina a 0,85%. Tampar e vortexar ou agitar vigorosamente por cerca de 1 min para desprender células do solo. Essa é a diluição 10^-1.

Passo 3

Realizar diluições seriadas: transferir ,1 mL da suspensão 10^-1 para um segundo tubo contendo ,9 mL de solução salina, obtendo 10^-2. Repetir o mesmo procedimento até a diluição desejada (por exemplo, 10^-5 ou 10^-6), sempre homogenizando cada tubo.

Passo 4

Semeadura em placas: para cada diluição, pipetar ,0,1 mL da suspensão e espalhar uniformemente sobre a superfície de uma placa de ágar nutritivo usando bastão de vidro esterilizado (método de espalhamento em superfície). Trabalhar perto de chama para manter assepsia.

Passo 5

Incubação: inverter as placas e incubar a 30!-!37,^circC por 24–48 h, dependendo do microrganismo alvo. Sempre identificar cada placa com o fator de diluição correspondente.

Passo 6

Contagem de colônias: após a incubação, escolher placas com entre 30 e 300 colônias (intervalo confiável) e contar cada colônia visível, usando contador de colônias ou lupa, anotando o valor e seu respectivo fator de diluição.

Passo 7

Cálculo do número de unidades formadoras de colônia por grama de solo ( CFU/g): aplicar a fórmula
CFU/g = número de colôniasvolume semeado (mL) times fator de diluição úôçã
Por exemplo, se contarmos 120 colônias na placa da diluição 10^-4 semeando ,0,1 mL,
CFU/g = 1200,1times10^4 = 1,2times10^7,

Resposta

O procedimento de contagem envolve:
  1. preparação da suspensão inicial de solo em solução salina (diluição 10^-1);
  2. diluições seriadas até a faixa desejada;
  3. semeadura de ,0,1 mL em placas de ágar;
  4. incubação a 30!-!37,^circC por 24–48 h;
  5. contagem de placas com 30–300 colônias;
  6. cálculo de CFU/g usando o fator de diluição e o volume semeado.

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