Descreva o procedimento de contagem em placas de microrganismos do solo feito na aula prática.
Passo 1
O enunciado pede para descrever o procedimento experimental de contagem de microrganismos em placas a partir de amostras de solo, tema ligado a microbiologia agrícola e ambiental. Para isso, vamos precisar de amostra de solo, solução salina estéril, tubos de ensaio, pipetas graduadas, placas de ágar nutritivo, estufa de incubação e contador de colônias ou lupa.
Passo 2
Preparação da suspensão inicial: pesar aproximadamente
de solo em tubo estéril e adicionar
de solução salina a
. Tampar e vortexar ou agitar vigorosamente por cerca de 1 min para desprender células do solo. Essa é a diluição
.
Passo 3
Realizar diluições seriadas: transferir
da suspensão
para um segundo tubo contendo
de solução salina, obtendo
. Repetir o mesmo procedimento até a diluição desejada (por exemplo,
ou
), sempre homogenizando cada tubo.
Passo 4
Semeadura em placas: para cada diluição, pipetar
da suspensão e espalhar uniformemente sobre a superfície de uma placa de ágar nutritivo usando bastão de vidro esterilizado (método de espalhamento em superfície). Trabalhar perto de chama para manter assepsia.
Passo 5
Incubação: inverter as placas e incubar a
por 24–48 h, dependendo do microrganismo alvo. Sempre identificar cada placa com o fator de diluição correspondente.
Passo 6
Contagem de colônias: após a incubação, escolher placas com entre 30 e 300 colônias (intervalo confiável) e contar cada colônia visível, usando contador de colônias ou lupa, anotando o valor e seu respectivo fator de diluição.
Passo 7
Cálculo do número de unidades formadoras de colônia por grama de solo (
): aplicar a fórmula
Por exemplo, se contarmos 120 colônias na placa da diluição
semeando
,
Resposta
O procedimento de contagem envolve:
- preparação da suspensão inicial de solo em solução salina (diluição
); - diluições seriadas até a faixa desejada;
- semeadura de
em placas de ágar; - incubação a
por 24–48 h; - contagem de placas com 30–300 colônias;
- cálculo de
usando o fator de diluição e o volume semeado.