Qual seria o comportamento cromatográfico de uma mistura de peptídeos PARANA (M.M. 598,66), MINASGERAIS (M.M. 1148,30) e SERGIPE (M.M. 786,84) sob as seguintes circunstâncias:
(b) Coluna de troca-iônica de ânions, eluente tampão fosfato
.
(b) Coluna de troca-iônica de ânions, eluente tampão fosfato
Passo 1
O enunciado pergunta como se comportam três peptídeos na cromatografia de troca iônica de ânions usando como eluente tampão fosfato
pH
. O conteúdo é cromatografia de troca iônica e para resolver vamos usar o conceito de ponto isoelétrico
e carga líquida do peptídeo em função do pH.
Passo 2
Em troca iônica de ânions a fase estacionária é carregada positivamente e retém espécies com carga líquida negativa. A força de retenção cresce com o grau de negatividade da molécula. Já moléculas com carga líquida positiva não são retidas e saem no volume de eluição (void volume).
Passo 3
O sinal da carga líquida de cada peptídeo em pH
é dado pela comparação entre o pH do medio e seu
:
• Se , a molécula está com carga líquida negativa (–) e será retida.
• Se , a molécula está com carga líquida positiva (+) e não será retida.
• Se , a molécula está praticamente neutra e terá retenção fraca ou intermediária.
• Se
• Se
• Se
Passo 4
Assumindo, para cada peptídeo, os valores típicos de
(obtidos experimentalmente ou por cálculo de resíduos):
• PARANA :
⇒ carga positiva ou neutra fraca ⇒ não se retém.
• SERGIPE :
⇒ quase neutro ou ligeiramente negativo ⇒ retenção moderada.
• MINASGERAIS :
⇒ carga negativa bem pronunciada ⇒ retenção forte.
• PARANA
• SERGIPE
• MINASGERAIS
Resposta
Eluição na ordem:
PARANA (não retida, sai primeiro)
SERGIPE (retenção moderada, sai em seguida)
MINASGERAIS (retenção forte, sai por último)
PARANA (não retida, sai primeiro)
SERGIPE (retenção moderada, sai em seguida)
MINASGERAIS (retenção forte, sai por último)