Quais os modos de eluição no HPLC e quando são usados?
Passo 1
E aí! O exercício tá perguntando quais são os modos de eluição em HPLC e quando a gente usa cada um deles. Isso envolve cromatografia líquida de alta eficiência, mais especificamente como a composição da fase móvel varia (ou não) durante a corrida. Para resolver, vamos precisar entender:
- O que é retenção de um soluto (fator de retenção
). - Como a força de eluição (composição da fase móvel) influencia o tempo de retenção.
- Em que situações cada modo (isocrático, gradiente linear, gradiente em degraus e variação de pH/temperatura) é mais vantajoso.
Passo 2
Modo Isocrático
- Aqui a fase móvel tem composição fixa o tempo todo. Saca só o fator de retenção:
onde é o tempo de retenção do soluto e o tempo do solvente não retido. - Como a composição não muda, cada composto “encontra” sempre a mesma afinidade com a fase estacionária.
- Quando usar?
• Mistura simples com poucos analitos e polaridades próximas.
• Quando os picos já saem bem separados e você quer método rápido e reprodutível.
Passo 3
Gradiente Linear
- Aqui a gente varia a fração do solvente orgânico (ou modificador) de forma linear com o tempo:
em que é a fração inicial e a razão de aumento por minuto. - A teoria mostra que o logaritmo do fator de retenção varia linearmente com
: (onde é uma constante empírica). - Quando usar?
• Misturas complexas, com compostos de polaridades bem diferentes.
• Se alguns analitos ficariam muito retidos num gradiente isocrático.
Passo 4
Gradiente em Degraus e Outros Modos
- Gradiente em Degraus (Step Gradient):
- A composição muda de um valor a outro de forma abrupta em momentos pré-definidos.
- Útil quando você sabe que, após uma certa fração, todos os compostos restantes vão sair juntos.
- Programação de pH:
- Em intercalação de tampões de pH diferente pra mudar a ionização do analito.
- Bom pra compostos ionizáveis ou com grupos ácidos/básicos.
- Gradiente de Temperatura:
- Variação controlada de temperatura da coluna.
- Indicado quando você quer “ajudar” a eluir compostos muito retidos sem mexer na fase móvel.
Resposta
- Modo Isocrático: fase móvel com composição fixa. Usado em misturas simples, poucos analitos e polaridades similares.
- Gradiente Linear: composição varia linearmente com o tempo. Ideal para misturas complexas, amplia faixa de eluição.
- Gradiente em Degraus (Step): mudanças abruptas de composição. Prático quando há grupos de compostos que saem juntos.
- Programação de pH: alterna tampões de pH para alterar a ionização de analitos. Bom para moléculas ionizáveis.
- Gradiente de Temperatura: varia a temperatura da coluna para controlar retenção sem mudar solvente.