25-30. Quais são os critérios para uma separação cromatográfica isocrática adequada?
Passo 1
O enunciado pede os critérios para avaliar se uma separação cromatográfica isocrática está “adequada”. O conteúdo aqui é desempenho de coluna em cromatografia (líquida ou gasosa) isocrática, envolvendo parâmetros como fator de capacidade, seletividade, eficiência, resolução, simetria de pico e reprodutibilidade.
Passo 2
O primeiro critério é o fator de capacidade
, que mede o tempo de retenção relativo de um analito. Define-se
onde
é o tempo de retenção do pico e
é o tempo morto (dead time). Para boa separação isocrática costuma-se exigir
valores abaixo de 1 indicam retenção fraca (picos quase na frente de solvente) e acima de 10 alongam demais o tempo de análise.
Passo 3
O segundo critério é a seletividade
, que expressa o “distanciamento” relativo entre dois picos consecutivos. Para dois compostos 1 e 2, com
,
Idealmente
a
. Quanto maior
, mais fácil é alcançar resolução satisfatória.
Passo 4
O terceiro critério é a eficiência da coluna, dada pelo número de pratos teóricos
. Uma expressão prática é
onde
é a largura do pico à meia-altura. Para análises de rotina busca-se
(colunas capilares em GC chegam a
–
).
Passo 5
O quarto critério é a resolução
entre dois picos. Para picos 1 e 2,
com
e
larguras à base dos picos. Para separação baseline pede-se
.
Passo 6
O quinto critério é a simetria de pico (fator de cauda
ou fator de assimetria
). O fator de cauda em 5 % da altura é
onde
é a largura do pico em 5 % da altura e
é a distância do pico ao ponto de cauda. Valores ideais ficam em torno de
(aceita-se
ou até
).
Passo 7
O sexto critério é a reprodutibilidade, geralmente expressa pelo desvio-padrão relativo (RSD) dos tempos de retenção e das áreas de pico em injeções repetidas. Para cromatografia analítica de rotina espera-se
Resposta
- Fator de capacidade
em - Seletividade
- Eficiência
(número de pratos teóricos) - Resolução
entre picos vizinhos - Simetria de pico
- Reprodutibilidade com
e