Quais os principais métodos de contagem de células microbianas?
Passo 1
O enunciado pede para listar e explicar os principais métodos de contagem de células microbianas. Este conteúdo envolve técnicas clássicas de microbiologia (crescimento em meio sólido e microscopia), métodos físico-químicos (turbidimetria), tecnologias celulares avançadas (citometria de fluxo) e abordagens moleculares (qPCR). Vamos revisar cada uma passo a passo.
Passo 2
Método de unidades formadoras de colônia (CFU): faz diluições seriadas da amostra (por exemplo, fatores de
,
,
), semeia volumes conhecidos em placas de ágar, incuba até formação de colônias e conta o número de colônias. Cada colônia teoricamente deriva de uma única célula viável, permitindo estimar concentração em CFU/mL.
Passo 3
Contagem direta em microscopia: usa câmara de Neubauer (hemocitômetro) ou câmara Petroff–Hausser para contar células em um volume fixo sob o microscópio. Frequentemente adiciona-se coloração (por exemplo, azul de tripano) para diferenciar células vivas das mortas. A concentração é dada em células/mL calculada a partir do número médio de células em quadrantes conhecidos.
Passo 4
Turbidimetria ou leitura de densidade óptica: mede a absorbância da suspensão celular em um espectrofotômetro a um comprimento de onda (geralmente
nm). A densidade óptica (DO) é proporcional à concentração de células, mas requer curva de calibração prévia para converter DO em células/mL.
Passo 5
Citometria de fluxo: a amostra é marcada com sondas fluorescentes e passada em fluxo único por um feixe de laser. Detecta-se e conta-se cada célula individualmente, obtendo informações de tamanho, granulosidade e viabilidade. Ideal para análises rápidas e multiparamétricas de populações celulares.
Passo 6
Métodos moleculares quantitativos: a reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) quantifica o número de cópias de um gene-alvo (por exemplo, rRNA 16S) na amostra. A partir de uma curva padrão, converte-se o número de cópias em número de células equivalentes, permitindo contagem sensível mesmo em baixas concentrações.
Resposta
Os principais métodos de contagem de células microbianas são:
- Unidades formadoras de colônia (CFU) em placas de ágar
- Contagem direta em microscopia com hemocitômetro
- Turbidimetria (densidade óptica)
- Citometria de fluxo
- Métodos moleculares quantitativos (qPCR)