Quais os principais métodos de contagem de células microbianas?

Passo 1

O enunciado pede para listar e explicar os principais métodos de contagem de células microbianas. Este conteúdo envolve técnicas clássicas de microbiologia (crescimento em meio sólido e microscopia), métodos físico-químicos (turbidimetria), tecnologias celulares avançadas (citometria de fluxo) e abordagens moleculares (qPCR). Vamos revisar cada uma passo a passo.

Passo 2

Método de unidades formadoras de colônia (CFU): faz diluições seriadas da amostra (por exemplo, fatores de 10^-1, 10^-2, dots), semeia volumes conhecidos em placas de ágar, incuba até formação de colônias e conta o número de colônias. Cada colônia teoricamente deriva de uma única célula viável, permitindo estimar concentração em CFU/mL.

Passo 3

Contagem direta em microscopia: usa câmara de Neubauer (hemocitômetro) ou câmara Petroff–Hausser para contar células em um volume fixo sob o microscópio. Frequentemente adiciona-se coloração (por exemplo, azul de tripano) para diferenciar células vivas das mortas. A concentração é dada em células/mL calculada a partir do número médio de células em quadrantes conhecidos.

Passo 4

Turbidimetria ou leitura de densidade óptica: mede a absorbância da suspensão celular em um espectrofotômetro a um comprimento de onda (geralmente 600 nm). A densidade óptica (DO) é proporcional à concentração de células, mas requer curva de calibração prévia para converter DO em células/mL.

Passo 5

Citometria de fluxo: a amostra é marcada com sondas fluorescentes e passada em fluxo único por um feixe de laser. Detecta-se e conta-se cada célula individualmente, obtendo informações de tamanho, granulosidade e viabilidade. Ideal para análises rápidas e multiparamétricas de populações celulares.

Passo 6

Métodos moleculares quantitativos: a reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) quantifica o número de cópias de um gene-alvo (por exemplo, rRNA 16S) na amostra. A partir de uma curva padrão, converte-se o número de cópias em número de células equivalentes, permitindo contagem sensível mesmo em baixas concentrações.

Resposta

Os principais métodos de contagem de células microbianas são:
  1. Unidades formadoras de colônia (CFU) em placas de ágar
  2. Contagem direta em microscopia com hemocitômetro
  3. Turbidimetria (densidade óptica)
  4. Citometria de fluxo
  5. Métodos moleculares quantitativos (qPCR)

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