Questão 5. Indique qual técnica ou método você utilizaria para atingir cada objetivo a seguir.
Estudar mudanças conformacionais em um complexo proteico.

Passo 1

O enunciado pede uma técnica para estudar mudanças conformacionais em um complexo proteico; isso requer um método que monitore variações de distância intramolecular na faixa de poucos nanômetros e consiga captar dinâmicas em tempo real.

Passo 2

Uma excelente escolha é a espectroscopia de transferência de energia por ressonância de Förster em única-molécula (smFRET), pois ela resolve distâncias de 1 a 10 nm e acompanha mudanças conformacionais ao longo do tempo.

Passo 3

O princípio do smFRET é rotular dois sítios da proteína com um fluoróforo doador e um aceitador; a eficiência de transferência de energia depende da distância r entre eles segundo
E = \frac{1}{1 + \bigl(\tfrac{r}{R_0}\bigr)^6},
onde R_0 é o raio de Förster (geralmente \sim5 nm).

Passo 4

No experimento prepara-se a proteína com aminoácidos mutantes contendo grupos reativos para marcação, fixa-se a molécula em superfície ou em vesícula, excita-se o doador em microscópio de fluorescência de TIRF, registra-se as intensidades do doador e do aceitador para cada molécula e converte-se em distâncias e populações conformacionais ao longo do tempo.

Resposta

smFRET (single-molecule Förster Resonance Energy Transfer)

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