Questão 5. Indique qual técnica ou método você utilizaria para atingir cada objetivo a seguir.
Determinar a massa e o ponto isolelétrico de uma proteína.
Determinar a massa e o ponto isolelétrico de uma proteína.
Passo 1
O enunciado pede dois objetivos de caracterização de proteína: determinar sua massa molecular e encontrar seu ponto isoelétrico, isto é, o valor de pH em que a proteína tem carga líquida zero. Para resolver, iremos escolher técnicas analíticas específicas para cada parâmetro.
Passo 2
Para determinar a massa molecular de uma proteína, a técnica mais precisa e amplamente usada é a espectrometria de massa. Em particular, a espectrometria de massa por ionização MALDI-TOF ou por eletrospray (ESI-MS) permite medir o tempo de voo ou a razão massa/carga dos íons gerados a partir da proteína pura, resultando na massa exata com alta resolução.
Passo 3
Para determinar o ponto isoelétrico
da proteína, emprega-se a técnica de foco isoelétrico (isoelectric focusing, IEF). Nela, a amostra migra num gel ou em capilar contendo um gradiente de pH até atingir o local em que seu pH iguala seu
, pois nesse ponto a proteína não se desloca mais por não haver carga líquida.
Resposta
Massa molecular: espectrometria de massa (por exemplo, MALDI-TOF ou ESI-MS)
Ponto isoelétrico: foco isoelétrico (IEF)
Ponto isoelétrico: foco isoelétrico (IEF)