QUESTÃO 2. Em relação ao uso de agentes redutores antes da digestão com tripsina, para posterior análise em espectrometria de massas ou sequenciamento de Edman, avalie se as seguintes afirmativas são verdadeiras (V) ou falsas (F) e justifique sua resposta:
I - Evitam a atividade autocatalítica da tripsina.
II - Favorecem a acessibilidade da tripsina ao substrato proteico.
III - Protegem as cisteínas contra a ação de proteases.
IV - Quebram as ligações disulfeto das proteínas.
V - Favorecem a formação de ligações disulfeto entre proteínas.
As afirmativas I, II, III, IV e V são respectivamente:
(A) V, F, V, V, F
(B) F, V, F, V, F
(C) F, V, V, V, V
(D) V, V, F, V, F
(E) F, V, V, F, V

Passo 1

O enunciado pede para julgar cinco afirmativas sobre o uso de agentes redutores (por ex. DTT ou β-mercaptoetanol) antes da digestão com tripsina, indicando se cada uma é verdadeira (V) ou falsa (F). Para isso, precisamos lembrar que o principal efeito desses agentes é reduzir ligações dissulfeto em proteínas, o que desnatura e estende a cadeia polipeptídica, tornando-a mais acessível à tripsina.

Passo 2

Analisando a afirmativa I – “Evitam a atividade autocatalítica da tripsina.” A autocatalise da tripsina ocorre por clivagem de suas próprias ligações peptídicas e não depende de ligações dissulfeto no substrato. Além disso, o agente redutor não tem como alvo preferencial a tripsina (queremos que ela permaneça ativa). Logo, esta afirmativa é falsa.

Passo 3

Analisando a afirmativa II – “Favorecem a acessibilidade da tripsina ao substrato proteico.” Ao reduzir ligações dissulfeto, o agente redutor desenrola a proteína, expondo seus sítios de clivagem (Lys e Arg) à ação da tripsina. Portanto, esta afirmativa é verdadeira.

Passo 4

Analisando a afirmativa III – “Protegem as cisteínas contra a ação de proteases.” Proteases clivam ligações peptídicas, não especificamente resíduos de cisteína. Redutores liberam grupos –SH, mas não inibem proteases nem “protegem” cisteínas de outras proteases. Assim, a afirmativa é falsa.

Passo 5

Analisando as afirmativas IV e V juntas:
– IV – “Quebram as ligações dissulfeto das proteínas.” Esta é precisamente a função dos agentes redutores, logo é verdadeira.
– V – “Favorecem a formação de ligações dissulfeto entre proteínas.” Redutores impedem a formação de novas pontes de dissulfeto, portanto esta é falsa.

Resposta

(B) F,\,V,\,F,\,V,\,F

Exercícios relacionados